Bất kỳ sinh vật định mà không giữ lại các vết bẩn đầu tiên (pha lê tím) được sử dụng ở Gram của nhuộm kỹ thuật. Nó giữ lại thứ hai vết (safranin O) và do đó có một màu hồng khi được xem dưới một kính hiển vi ánh sáng. Lưu trữ của vết là do cấu trúc của tế bào.