เทคนิคการแทรกดีเอ็นเอที่และเวกเตอร์ย่อยโมเลกุล มีข้อจำกัดแตกต่างกันสองเอนไซม์สร้างไม่เสริมเหนียวปลายที่เป็นจุดสิ้นสุดของแต่ละส่วนการจำกัด ดังนั้น ให้แทรกจะถูกควบกับเวกเตอร์ในการระบุ และป้องกันเวกเตอร์ใหม่ circularizing