Technika, przez który Wstaw DNA i wektor cząsteczki są trawione z dwóch różnych enzymy stworzyć-uzupełniające lepkimi końcami na obu końcach każdego fragmentu ograniczeń, umożliwiając Wstaw, aby być połączone do wektora w określoną orientację i uniemożliwia ponowne circularizing wektora.